實驗原理

該染色項目是對骨和軟骨進行染色以觀察脊椎動物骨骼在生理和病理狀態(tài)下的改變，阿利新藍是一種含銅離子的苯二甲藍染料，一種陽離子染料,與硫酸根和糖蛋白結(jié)合強烈，可將黏多糖染成藍色，在骨染色中把軟骨染成藍色。茜素紅是陰離子染料能與鈣結(jié)合形成紅色沉淀，在骨骼染色中可將鈣化的骨基質(zhì)染成紅色。    
實驗步驟

1、樣本處死：將胎鼠浸入無水乙醇 20 分鐘，觀察至呼吸停止未見掙扎，取出。

2、剝皮：將標(biāo)本浸入 70 攝氏度熱水中水浴加熱 25 秒，觀察至標(biāo)本腫脹皮膚變白后，立即取出，浸入冷水或酒精，剝皮去內(nèi)臟。

3、標(biāo)本固定：把去皮后的標(biāo)本整理好姿勢，（若標(biāo)本脂肪過多，浸入 3% 重鉻酸鉀溶液中幾天，除去材料表面的臟物和脂肪粒塊。當(dāng)溶液變渾濁時即更換 C 新液，觀察至溶液不渾濁為止，取出用清水沖洗），再浸入 95% 乙醇中繼續(xù)固定 2-3 天，觀察至標(biāo)本脫水硬化。

4、軟骨染色：將標(biāo)本浸泡于軟骨染色液中，觀察至肋骨、脊柱、尾骨處軟骨呈現(xiàn)藍色,取出,使用 70%酒精溶液反復(fù)進行清洗，直至沖洗液顏色無色，梯度酒精復(fù)水。

5、消化加預(yù)透明:標(biāo)本放入消化液中，使肌肉顏色變淺，時間控制在一小時以內(nèi)，以防過度脫色軟化，放入 1%KOH 中進行預(yù)透明，觀察至肌肉變軟透明，呈果凍狀，取出。

6、硬骨染色：將標(biāo)本浸泡于硬骨染色液中，每十五分鐘觀察一次，觀察至顱骨，足趾部，脊柱處硬骨呈現(xiàn)深紅色，取出。

7、脫色：：將染色后的標(biāo)本浸泡于 2%的 KOH 溶液中 8-12 小時，再浸泡于 1.5%的 KOH 溶液中 12-24 小時，最后浸泡于 1%的 KOH 溶液中 2-3 天，觀察至肌肉顏色變?yōu)闊o色呈果凍狀，骨組織變?yōu)榧t色，取出。

8、梯度透明：將標(biāo)本依次浸泡于 1%的 KOH 溶液與丙三醇所形成的梯度溶液,配比比例分別為： 1：4、2：3、3：2、4：1，標(biāo)本在梯度溶液中浸泡的時間為 1-2 天。，每次均以標(biāo)本沉入梯度溶液底部為準(zhǔn)，最后置于純甘油中進行密封保存。

結(jié)果判讀：

標(biāo)本無多余肌肉且肌肉透明無色，骨骼完整，硬軟骨染色區(qū)分明顯。

注意事項：

1． 剝離皮膚時保證骨骼完整性，尤其是腕、踝部；

2． 采用試管進行梯度透明，更方便觀察透明程度。

3. 標(biāo)本較多時防止染色液濃度變小，需定時對染色液進行替換。