【儲存與運輸】

本試劑常溫保存運輸，有效期一年。

【實驗前準備】

自備蘇木素分化液、蘇木素返藍液、二甲苯、梯度乙醇、無水乙醇、中性樹膠等。

【使用方法】

一、樣本前處理

1、對于石蠟切片：切片依次經二甲苯脫蠟 12 min，更換新鮮的二甲苯脫蠟 12 min，無水乙 醇 5min，新鮮無水乙醇 5 min，95%乙醇 5 min，85%乙醇 5 min， 自來水洗。

2、對于冰凍切片：-20℃保存的冰凍切片需靜置恢復至室溫,經所需固定液固定后水洗。

二、HE 染色

1、蘇木素染色：上述處理好的切片，進入蘇木素染液染色 5min， 自來水洗；

2、分化：切片經蘇木素分化液 1-3s， 自來水流水充分沖洗；

3、返藍：蘇木素返藍液返藍 10-15s， 自來水流水充分沖洗；

4、伊紅染色：切片經 85%乙醇脫水 2min，然后進入伊紅染液(醇溶)中染色 10-15s，經 95% 乙醇分色 5-10s,經兩次無水乙醇脫水各 3min；

5、透明：切片入二甲苯透明 3min，更換新鮮的二甲苯再透明 3min。

6、封片：滴加中性樹膠進行封片。

【注意事項】

1.染色后用特定溶液將組織中過多結合的染液脫去，這個過程稱為分化作用，組織在經蘇 木素染色后，必須經過分化去除組織中過多結合及非特異性吸附的染料，才能進行伊紅染 色，確保細胞核與胞漿顯色分明。分化過程中，根據組織切片厚度、組織類型等結合鏡下 觀察適當調整分化時間。

2.HE 染色中蘇木素染色后的返藍很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài)，呈紅色；在堿 性條件下呈藍色。組織切片經酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化， 再用弱堿性溶液使蘇木素，這個過程就是返藍作用。如果沒有專用的返藍液，用溫水浸洗 也能使細胞核返藍，只是所需時間略長。                                            

3.蘇木素及伊紅染色程度可以根據染色需要進行調整染色時間。                       

4.蘇木素染液可重復使用多次，當組織或細胞著色明顯偏淺或顏色異常時請更換新的染 液。

5.用于染色后脫水的無水乙醇純度需大于 99.9%。如果乙醇含水，伊紅會褪色導致染色不 均勻。

6.伊紅染液(醇溶)可反復使用數次，當組織著色明顯偏淺時建議更換新的染液。

7.操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。